有机化合物通常具有紫外-可见光谱吸收,通过对其吸收曲线中最大吸收波长和吸收值的分析可获得化合物的结构和含量等信息。有研究表明,通过对挥发油的紫外-可见光谱进行分析可了解挥发油的大致组成成分种类[1]以及成分的含量,并可用于挥发油稳定性的考察[2]。由于挥发油组成成分复杂,对其具体成分的分析通常采用GC/MS法,但成本较高,耗时较长(多数时候需几十分钟)。采用紫外-可见吸收光谱法对挥发油进行分析虽然对具体成分种类和含量的测定存在困难,但在仅需获得挥发油大体情况时可有效地降低成本,缩短分析时间。
研究发现,不同鱼腥草居群间挥发油存在化学型分类,可分为月桂烯型(M型)和癸醛型(D型)[3],但这种化学型的差异对挥发油的紫外-可见吸收光谱产生的影响还未有报道。因此,本研究对不同鱼腥草材料的挥发油进行紫外-可见光谱分析,比较材料间挥发油的紫外-可见吸收光谱的差异并划分吸收光谱类型,进一步分析吸收曲线类型与其化学型间的关系,以期找到一种能快速评价鱼腥草挥发油质量的方法。
1仪器与材料
1.1仪器与试剂Agilent公司6890/5973N型气质联用仪,Shimadzu公司UV-265型紫外-可见分光光度仪,Sartorius公司CP225D型电子天平,ICE公司Micromax型离心机,Labarey公司微量移液器。
1.2材料试验材料包括13份鱼腥草HouttuyniacordataThunb.,材料来源见表1,均栽培于四川农业大学教学科研农场。完全随机化试验设计,除材料w01-39种植4个小区(分别记为w01-39-1、w01-39-2、w01-39-3和w01-39-4),面积共40m2,其余每份材料种植面积6m2,田间管理同大田生产。由于采样时间不同所造成的环境条件的不完全相同会对挥发油产生一定影响。因此,将本研究中不同时间采收的相同材料列为不同供试样品(均在2007年,具体日期列于表1),13份蕺菜材料共获得23份供试样品。表1材料来源及采收时间(略)
1.3试剂试剂均为分析纯。
2方法
2.1挥发油成分的提取和GC/MS分析提取:取鱼腥草地上部分,洗净,擦干后剪碎后称取80g置圆底烧瓶中,加入蒸馏水500ml,共水蒸馏提取4h,加2ml醋酸乙酯于收集管内作为溶剂,收集醋酸乙酯层,用醋酸乙酯定容至10ml,密封保存于4℃冰箱。
GC条件:色谱柱为HP-5MS(30m×0.32mm×0.25μm);载气为He气;流速1ml/min;程序升温以5℃/min从70℃到150℃,保持2min,然后以10℃/min从150℃到220℃,保持5min;气化温度250℃;进样量1μl;分流比50∶1。
MS条件:电离能量:70ev;离子源温度:230℃;四极杆温度:150℃;检测方式:Scan;质量范围:50~550M/Z。
2.2紫外吸收光谱测定取“2.1”项下试样至离心管中以10000r/min离心10min,取上清液适量(50~200μl)加醋酸乙酯稀释2ml后测定其各自的紫外吸收光谱并确定各吸收峰的波长。测定条件为:扫描范围:200~380nm;扫描方式:吸光度;扫描速度:快速;狭缝宽度:2nm;参比溶液:醋酸乙酯。根据确定的各吸收峰波长,取上清液150μl加醋酸乙酯稀释至2ml,在吸收峰波长下测定试样的吸光度,重复4次。
2.3数据处理与统计分析总离子流色谱图中各峰通过NIST2.0质谱数据库检索以及人工鉴定,采用峰面积归一法计算各峰的百分比含量,根据挥发油化学型划分方法[3]判定本研究中各试样挥发油的化学型。根据吸收曲线最大吸收波长λmax和吸收峰数量以及形状,划分吸收曲线类型;挥发油吸光度的方差分析和SSR多重比较采用DPS3.0软件进行。
3结果
3.1挥发油的化学型和紫外吸收光谱23份试样挥发油的化学型划分(见表1),而它们的吸收曲线可大致划分为5类。见图1。
由图1可知,23份试样鱼腥草挥发油的紫外吸收曲线的最大吸收波长λmax主要是252nm和267nm,试样所属的吸收曲线类型以及类型的特征列于表2。从表2可以看出,鱼腥草挥发油的紫外吸收曲线多数是以267nm波长为最大吸收波长,23份试样中有11份,以252nm波长为最大吸收波长的试样有7份,其余5份试样的最大吸收波长从图1不能确定。表2试样所属的吸收曲线类型及其特征。
(来源:光谱仪)